(1)方針微生物的品種 不同品種的微生物在細胞構造、生理特性、體內代謝等方面存在著差異，有的差異較大，如細菌和真菌之間，前者歸于原核生物，后者歸于真核生物，前者細胞壁的主要成分為肽聚糖，后者的細胞壁主要由幾丁質構成等。有的差異較小 如同一個屬的各類菌。由于有這樣那樣的差異，所以各種微生物對滅菌劑作出的反響也不盡相同：
①細胞壁成分的差別影響著滅菌劑進人細胞的難易；
②原生質膜結構的差異造成了膜對物質通透性的差異，對滅菌劑能否順利觸摸作用部位有著重大的影響；
③微生物細胞內的代謝途徑中是否存在著受滅菌劑進犯的作用點，這個作用點對'這種微生物又是不是“致命”的，關系到滅菌作用的有無和巨細；
④有些品種的微生物具有分化滅菌劑尤其是有機滅菌劑的身手，使滅菌劑失效；
⑤有些微生物還會對某些滅菌劑發生抗藥性。
(2)微生物的開始污染量 研討證明，當資料或產品污染微生物數量特別大時，本來作用表現得很好的滅菌劑也常常失掉其維護作用，原因可能是：
①當微生物很多繁衍時，會分泌出一些維護性的物質，把菌體包裹起來，使滅菌劑不能與之觸摸，因而起不到應有的作用，如微生物分泌的蛋白質維護層使季銨化合物、尼泊金酯、酚醛、含汞制劑失掉滅菌活性；
②很多的微生物在被殺死時耗費了很多的滅菌劑并使之降至有用滅菌濃度以下，使殘存的菌又很快繁衍起來。有人在研討抗壞血酸對生胞梭菌(、C. sporogenes)的芽胞滅菌作用時發現，若用0.2% 抗壞血酸，在75℃處理60min，每毫升10 (2)芽胞時，滅菌率為99%， 而每毫升10(6)個芽胞時，滅菌率僅為37%。